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這是你知道的免疫組化試劑盒的操作步驟嗎?

日期:2022-08-18 23:44
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摘要:這是你知道的免疫組化試劑盒的操作步驟嗎? 免疫組化試劑盒的操作步驟: 1、60℃常規脫蠟至水后,將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ,二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水,每次3-5min。 2、熱修復抗原:將切片置于0.01mol/LpH6.0枸櫞鈉緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10min后,反復1-2次,置于室溫自然冷卻。0.01mol/LpH6.0的PBS洗滌3次,每次5min 3、消除內源性過氧化物酶:用3%H2O2室溫孵育5-10min,以消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5min;
這是你知道的免疫組化試劑盒的操作步驟嗎?

 免疫組化試劑盒的操作步驟:
 1、60℃常規脫蠟至水后,將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ,二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水,每次3-5min。
 2、熱修復抗原:將切片置于0.01mol/LpH6.0枸櫞鈉緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10min后,反復1-2次,置于室溫自然冷卻。0.01mol/LpH6.0的PBS洗滌3次,每次5min
 3、消除內源性過氧化物酶:用3%H2O2室溫孵育5-10min,以消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5min;
 4、滴加一抗:滴加適當稀釋的一抗到切片上,37℃孵育1小時左右或者4℃過夜,pH7.4的PBS洗滌3次,每次5min。一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說,陽性染色強度不夠時,可提高一抗濃度和延長孵育時間;背景過高時,可降低一抗濃度和縮短孵育時間。
 5、加入廣譜二抗,37℃孵育1小時,取出后PBS洗滌3次,每次5min。
 6、DAB顯色:取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片上,室溫顯色,鏡下控制反應時間。若無背景出現則可繼續顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應。

 7、觀察顯色后自來水沖,蘇木目精復染1-2min,,自來水沖10min,梯度酒精脫水,二甲本苯透明,中性樹膠封片,干燥,分析拍照。

 
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